Immunoloogia praktikumi protokoll
kraadi juures üleöö.
Peseme membraani 4x5min TBS/Tween.
Sekundaarse antikeha sidumine, inkubeerimine ja pesemine 2x
TBS/Tween ja 1x TBS.
3. Membraani visualiseerimine.
Tõstame membraani kiledele ja kanname peale substraat
(SuperSignal West (Pierce) mõlemad 0,5ml) ja ootame 5 min.
Visualiseerime membraani.
1 2 M
Ka siin on näha, et uuritavat valku on palju. Kõrval
olevale kontrollrajale on arvatavasti mingi saastus
tekkinud.
Direct ELISA.
Direct ELISA puhul sorbeeritakse antigeenid otse plastikule, seejärel
antigeenile külge ensüümiga konjugeeritud antikehad. Immuunreaktsiooni
tulemus visualiseeritakse ensüüm- substraat kompleksi värvusreaktsiooni
abil ja hinnatakse kvalitatiivselt ja/ või kvantitatiivselt värvireaktsiooni
intensiivsuse alusel mõõdetuna vastaval lainepikkusel.
Töö käik:
Meil on olemas ELISA plaat 16-ne süvenditega. Süvenditesse me