"kloneerimisvektorisse" - 1 õppematerjal

Molekulaarbioloogia aruanne

CTCCCCCTGCTCCCAGCATTACCACCTTGTACTCTCTGGACCCGCCTGATGCGCTGCCCGGGG AGCAGCTGGCTTCATTTTCTACCTCGGATCC 70. 71. 72. 73. Plasmiidse DNA edasine kasutus 74. Olenevalt sellest, millisteks katseteks uuritavat järjestust vaja on, toimub edasine kloneerimine. Kui tegu on valku kodeeriva DNA järjestusega, mida soovitakse ekspresseerida mõnes eukarüootses rakus või rakuliinis, siis tõstetakse lihtsasse bakteriaalsesse kloneerimisvektorisse sisestatud järjestus edasi mõnda ekspressiooni vektorisse. Selline vektor sisaldab vajalikke järjestusi valgu ekspressiooniks rakkudes, aga ka bakteris paljundamist võimaldavaid elemente, kuid millesse kloneerimine otse PCR-ist oleks liiga tülikas. Seega restrikteeritakse esialgsest bakteriaalsest vektorist soovitud järjestus uuesti välja ja ligeeritakse samade restriktaasidega lõigatud ekspressioonivektori MCS-i. Uut