"katsutite" - 1 õppematerjal

Meditsiinilise mikrobioloogia praktikum

• 50 mM KCL; • 1,5 mM MgCl2; • 200 µM igat dNTP; Töö käik. 1. Lisa katsutisse, mis sisaldab PCR kuulikest, reagendid alljärgnevas järjestuses: 1.1. 2 µl praimerit ERIC1 R (5’-ATG TAA GCT CCT GGG GAT TCA C-3’); 1.2. 2 µl praimerit ERIC1 F (5’-AAG TAA GTG ACT GGG GTG AGC G-3’); 1.3. 10 µl kuumutatud bakterite suspensiooni; 1.4. Lisa steriilset destilleeritud vett kuni lõppmahuni 25 µl. 2. Sulge katsutid korgiga ja märgista 3. Sega katsutite sisu vortexil tagamaks PCR kuulikeste sulamist. Vajadusel võib kasutada steriilset pipetti. PCR kuulike peab olema täielikult sulanud! 4. PCR reaktsiooni teostamine termotsükleris. Kasutada on kas Eppendorf Mastercycler® gradient või Mastercycler. PCR reaktsiooni etapid on järgmised: 1. denaturatsioon 94ºC juures 5 minutit – tagab DNA ahelate täieliku denaturatsiooni; 2. amplifitseerimine 40 tsüklit järgmise režiimiga: • 1 minut 94ºC; • 1 minut 50ºC;