Immunoloogia praktikumi protokoll
Töö koosneb kolmest etapist:
1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil.
2. Valkude ülekandmine membraanile.
· Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min.
· Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Paneme bloti aparaadi
anoodplaadi peale puhvris olnud filtri, membraani, geeli ja jälle filtri. Rullime kõik
mullid välja ja paneme katoodplaadi peale.
· Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V.
· Pärast ülekannet tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani
3% BSA , 0,05% TBS/Tween-20 lahusesse (piimalahus) üheks tunniks.
· Meie primaarse antikehaga ei sidunud, panime otse sekundaarse.
· Peseme membraani 4x5 min TBS/Tweenis
· Sekundaarse antikeha sidumine, inkubeerimine ja pesemine 2x TBS/Tween ja 1x
TBS.
3. Membraani visualiseerimine.
annaabi.ee 
