Proteolüütilise ensüümi aktiivsuse määramine
tagasi termostaati.
· 5, 10, 15-l minutil võtame veel 3 ml proovi ja lisame seda 2, 3, ja 4-le trikloorädikhappe
sisaldavasse katseklaasidele.
· Selle tulemusena tekkib katseklaasides valge sade(pikad polüpeptiidid, mis reageerisd
TKÄga, sade meile ei ole vaja).
· Filtreerime 4 katseklaasi sisaldava lahusi.
· Spektrofotomeetriga määrame 4 proovi optilise tiheduse väärtused lainepikkusel 280nm.
· Kalibrimisgraafikut kasutades leitakse proovide optiliste tiheduste järgi nendes sisalduva
türosiini kontsentratsioon.
· Saadud andmete alusel koostame graafik, mis väljendub türosiini kontsentratsiooni ja
reaktsiooni kestvuse vahelist sõltuvust. (Ctyr=f(t)).
· Leiame ensüümipreparaadi proteolüütilist aktiivsust(A), kasutade antud valemi:
A= Ctyr 103 V1 V2 2/t 181 V3 g
Kus:
Ctyr -türosiini kontsentratsiooni muudus valiud ajavahemikus (mg/ml)