Molekulaarbioloogia praktikumi protokoll
(8) Kuumuta 95 oC, 2-3 min (DNA denatureerub, ahelad eralduvad) ja jahuta jääl.
(9) Säilita selliselt saadud fluorestsents-märgitud DNA 4oC juures, kuni automaatsekvenaatorisse
panemiseni.
15
Lisaülesanded:
5.1) Sekveneerimissegu sisaldab nii dNTP kui ddNTP, mis on nende erinevus?
dNTP-desoksü, ddNTP-didesoksü (2' ja 3' asendites vesinikud, terminaatornukleotiid). ddNTP ei
inkorporeeru nii hästi, pannakse lahusesse suure kontsentratsiooniga (ülehulgas).
5.2) Kui ddNTP inkorporeerub kasvavasse DNA ahelasse, miks ekstensioon termineerub?
3' otsas on vesinik, ei saa moodustuda fosfodiesterside järgmise nukleotiidiga.
5.3) Pikemad järjestused (>1000 nt) sekveneeritakse järestuse otstest kahe erineva vastassuunalise
praimeriga kahes erinevas katseklaasis. Miks ei teostata sekveneerimist kahe erineva praimeriga ühes
katseklaasis?
annaabi.ee 
