Molekulaar- ja rakubioloogia
plasmiidse DNA kogus
iv. hoolikus supernatandi eemaldamisel (tuleb eemaldada võimalikult suur
kogus supernatanti, ilma, et sade kaasa tuleks, vastasel juhul kas
kaotatakse osa saagisest, või võetakse kaasa jääke)
6. Kontroll-restriktsioon
a. Kontroll-restriktsiooni on vaja, et kontrollida, kas saadud plasmiid on õige, see
võimaldab ka näha, kas puhastamine oli efektiivne foreesipildilt on näha, kui
proovis on lisaks saadud plasmiidile ka näiteks bakteriaalset DNA-d. Valides
sobivad restriktaasid, on võimalik kontrollida, kas insert on plasmiidi
sisenenud õiget pidi.
b. Kasutasime restriktaasi EcoRI, mis lõikab kahelt poolt EcoRV lõikamissaiti,
kuhu sisestasime oma inserdi. See võimaldab tükkide pikkuste järgi määrata,
kas insert on vektorisse sisenenud või mitte.
Protokoll:
1. Pipeteerida: