Molekulaarbioloogia aruanne
0,5 μM) –
komplimentaarsed vastassuunaliste ahelate otsadele
0,2 μl 25 ng/μl template-DNAd (lõppkonts. 0,25 ng/μl) – sisaldab DNA osa, mida on
vaja paljundama
0,1 μl 5 U/μl HotFIRE Pol Polümeraasi (lõppkonts. 0,5 U/μl) – katalüüsib PCRi,
peab säilitama oma aktiivsust kõrgel temperatuuril. Taq polümeraasid ei oma proof-
reading aktiivsust (3’ – 5’ exonukleaasset aktiivsust), seega neil puudub võime kord
valesti lülitatud nukleotiidi õigega asendada. See on tähtis TA-kloneerimisel, kuna
meil on vaja, et moodustaksid sobivad restriktsioonisaidid edasiseks kloneerimiseks,
kus 3’ otsas on adeniin ja 5’ otsas on tümidiin ning vektori ja inserdi ligeerimisel
toimub A-T otste paardumine.
2. Segasin kõik vortexiga, fuugisin ning asetasin segu PCRi masinasse.
3. PCRi programmi kirjutamine:
1
annaabi.ee 
