"etanoolidga" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum

 Re-suspendeerin bakterisademe E1 lahuses.  Lisan E2 lahuse ja loksutan tuubi  Inkubeerime 2 minutit, kuni lahus muutub selgemaks.  Pipeteerime peale E3 lahuse ja raputame segu.  Tsentrifuugin 5 minutit  Tõstan supernatandi uude tuubi ja lisan sinne isopropanooli.  Tsentrifuugin plasmiidse DNA 10 mini.  Eemaldab supernatandi ja viskan selle ära.  Pesen sadet etanoolidga.  Suspendeerin 30 µl MQs. Mis juhtub erinevate biomolekulidega aluselises keskkonnas? Aluselise keskkonna loob E2 lahus. Selle tagajärjes bakteriraku membraani fosfolipiidid moodustavad mitsellid ja valgud denatureeruvad. NaOH denatureerib DNA kõrgemat järku struktuurid. Kuidas tagada, et välja puhastuks vaid meid huvitav plasmiidne DNA, mitte bakteri enda genoomne DNA. Peale E2 lahuse lisamist ei tohi liiga kaua inkubeerida. Muidu denatureerub ka