"elektroforeesipuhvrid" - 1 õppematerjal

Meditsiinilise mikrobioloogia praktikum

ELEKTROFOREESI PUHVER. DNA liikumist mõjutavad elektroforeesipuhvri koostis ja ioontugevus. Ioonide puudumisel (kui foreesipuhvri asemel oleks vesi) on elektrijuhtivus minimaalne ja DNA migreerub väga aeglaselt või üldse mitte. Väga kõrge ioonse jõuga puhvris (nt. 10× foreesipuhver) on elektriline juhtivus väga kõrge ja eraldub palju soojust isegi keskmistel pingetel. Selle tulemusena võib geel sulada ja DNA denatureeruda. Elektroforeesipuhvrid tehakse tavaliselt kontsentreerituna ning neid hoitakse toatemperatuuril. TAE (tris-atsetaat) puhver on neist kõige väiksema puhverdusvõimega ning „väsib“ pikaajalisel foreesil. Sel juhul muutuvad geeli anoodsed komponendid („-„ laenguga) happelisteks ja broomfenüülsinine, mis liigub anoodi suunas, muutub sinakaslillast kollaseks. See muutus algab pH 4.6 juures ja 1õpeb pH 3.0 juures TBE (tris-boraat) on veidi kallim, kuid suurema puhverdusvõimega. Kaheahelalise