"ekspressioonivektorit" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum

Double Digest soovitaks meie reaktsiooniseguks: 16   1x BamHI puhver  1x BamHI  2x SalI Incubate at 37°C Lõigates nii pSTBlue1 vektorit saame eraldada oma inserdi mis on kuskil 700bp ja pEGFP-C vektori lõikamisel lõikame sealt kuskil 20 bp välja ja kasutame ülejäänut pikka vektorit. Millised katsed tuleb teostada, et saaksime kätte 1µg sellist GFP ja sinu kloneeritud valku kodeerivat ekspressioonivektorit? 1. Lõikame restriktaasidega nii doonor kui akseptor DNA’d. Selleks on vaja BamHI ja SalI restriktaasi ja BamHI puhvrit. Inkubeerime 4h – üleöö 37 kraadi juures 2. Valame agaroosgeeli ja isoleerime DNA fragmendid agaroosis. Kanname hambasse enda restriktsioonisegu + 6x DNA värvi. Soovime doonorvektorilt saada inserti ja akseptorvektorilt lühikest juppi eemaldada. Selleks lõikame huvipakkuvad fragmendid DNA’st välja ja puhastame DNA