"dsmo" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

In vitro saab kasvatada erinevaid rakke – nii primaarsed (võetud koest, normaalsed rakud ja olenevalt organiismi vanusest ja rakutüübist jagunevad piiratud arv kordi), kui ka rakuliini – rakud, mis ei ole normaalsed ja nende jagunemine on piiramatu (embrüonaalsed rakud, kasvaja rakud). Praktikumis kaustati hiire embrüonaalseid fibroblaste, mis oli säilitanud vedelas lämmastikus, lühemat aega säilivad ka -80 °C juures. Selleks, et rakke kaitsa, lisatakse DSMO-d ja seerumit. Rakke on vaja külmutada selleks, et pidurdada kõike molekuraalse protsessi ja krüokaitse on vaja selleks, et takkistada veekristallide tekkimist, muidu rakud lähevad lõhki. Rakud tuleb sulatada aeglaselt 1 °C ni ning kiiresti 37 °C ni, sest nemad on töödeldatud DSMOga, mis on mürg. Loomarakud on suhteliselt õrnad ja satuvad kergesti stressi. Nendega kokkupuutuvad lahused peavad olema eelsoojendatud (v.a DMSO) vähemalt toatemperatuurini. 1