Molekulaar- ja rakubioloogia praktikum
pikka vektorit.
Millised katsed tuleb teostada, et saaksime kätte 1µg sellist GFP ja sinu
kloneeritud valku kodeerivat ekspressioonivektorit?
1. Lõikame restriktaasidega nii doonor kui akseptor DNA’d. Selleks on vaja
BamHI ja SalI restriktaasi ja BamHI puhvrit. Inkubeerime 4h – üleöö 37
kraadi juures
2. Valame agaroosgeeli ja isoleerime DNA fragmendid agaroosis. Kanname
hambasse enda restriktsioonisegu + 6x DNA värvi. Soovime
doonorvektorilt saada inserti ja akseptorvektorilt lühikest juppi eemaldada.
Selleks lõikame huvipakkuvad fragmendid DNA’st välja ja puhastame DNA
agaroosgeelist. Kaalume enda väljalõigatud osa ja lisame sellele ADB
puhvrit. Inkubeerime 55 kraadi juures kuni kogu geel on sulanud ja lahus
on homogeenne. Seejärel pipeteerime kõik segu ränikolonni, DNA jääb
räni külge. Tsentrifuugime. Valame kogumistopsist puhvri ära ja peseme 2
korda pesupuhvriga
annaabi.ee 
