Molekulaarbioloogia 2. töö küsimused
paremini ligi/ struktuur pärlikee)
Kirjelda eksperimenti, mille abil saab tuvastada transkriptsiooni faktorite sidumise
aktiivsust promootorsaidil
1) DnaasI footprinting põhineb asjaolul, et kui valk istub DNA peal, siis ta kaitseb viimast
eksonukleaaside aktiivsuse vastu. Kui DNA fragmendid ühest otsast radioaktiivselt märkida ning
eksponeerida neid eksonukleaassele aktiivsusele, siis geeli autoradiogrammil on näha valgu
olemasolul ja puudumisel erinevad DNA mustrid. DNA ja valgu kompleksi puhul esinevad DNA
järjestusalas ,,augud" (footprintid). Footprintinguga saab määrata ka järjestust, millele uuritav valk
seob.
2) EMSA on kasulik meetod DNAd siduvate valkude kvantitatiivseks analüüsiks. Üldjuhul on DNA
fragmentide elektroforeetiline mobiilsus langenud, kui nad on valguga kompleksis, mis põhjustab