"alexa546" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

PBS lahuses a. 40 µl 2% BSA lahust b. 360 µl 1x PBSi c. Mouse anti tubuliin 1:500 0,8 µl, segada. 2. Lisada rakkudele ja inkubeerida 60-90 minutit toatemperatuuril. 3. Pesta 3 korda 5 minutit á 1 ml PBS-Tweeniga. V Inkubatsioon sekundaarse antikehaga. 1. Valmistada sekundaarse antikeha lahjendused 0,2% BSA-PBS lahuses (vaja on kahe klaasi jagu, seega kokku 2x200=400µl). a. 40 µl 2% BSA lahust b. 360 µl 1x PBSi c. Goat anti mouse Alexa546 1:2000 0,2 µl, segada. 2. Inkubeerida 45-60 minutit toatemperatuuril, kaitsta valguse eest. 3. Pesta 3 korda 5 minutit 1 ml PBS-Tweeniga. 4. Pesta 2 korda 5 minutit 1 ml PBSiga. 5. Pesta 1 kord 1 ml milliQ (destilleeritud) veega. VI Alusklaasidele panemine ehk sulundamine 1. Kirjuta alusklaasile oma nimi ja kuupäev, samuti kasutatud antikeha. 2. Pigistada tuubist alusklaasidele väike tilk DAPIga sulundamislahust. 3. Võta katteklaas pintsettide vahele ja kuivata serv vastu pehmet paberit.