Proteolüütilise ensüümi aktiivsuse määramine
neeldumismaksimumile spektrofotomeetriliselt hõlpsasti detekteeritavad.
Proteolüütilise aktiivsuse ühikuks on 1 kat. See on ensüümi hulk, mis põhjustab 1
mikromooli peptiidsidemete hüdrolüüsi 1 sekundi vältel 30 °C juures.
Töö käik
Kõigepealt valmistasin 5 ml uuritavat proteaasi lahust. Selleks kaalusin 0,0049 grammi tahket
ensüümipreparaati (Alcolase) ja lahustasin selle boraatpuhvris 5 ml-ni (pH=8,4).
Järgnevalt pipeteerisin suurde katseklaasi 25 ml 2%-list kaseiini lahust ja asetasin lahuse
kümneks minutiks vesitermostaati 30 °C juurde soojenema.
Samal ajal kui lahus soojenes, pipeteerisin nelja kuiva katseklaasi, igaühte 3 ml 5%-list
trikloroäädikhappe lahust.
Kui kaseiini lahus oli 30 °C-ni soojenenud, lisasin sellele 1 ml uuritavat proteaasi lahust,