Ainete segu lahutamine geelkromatograafia meetodil
Geelid koosnevad kas dekstraanist,
agaroosist, või D-galaktoosist.
Kui läbi kolonni juhtida erineva molekulmassiga ainete segu siis molekulid lahutuvad vastavalt suurustele. Et
segu läbi kolonni transportida ning erineva molekulmassiga ained lahutada voolutatakse seda sobiva
vesilahusega ning kogutakse eluaati kindla mahuga fraktsioonide kaupa.
Töö käik
Ettevalmistus
· Töös kasutasin geeli Sephadex G-75 ning tema fraktsioneerimispiirkond on 3000-80000D, k = 0,1
· Täidise kõrguseks mõõtsin L = 32cm ja läbimõõduks d = 1,7cm -> r = 0,85cm
· Arvutasin täidise kogumahu: Vt = L·r2= 32 · 0,852 = 72,63cm3
· Arvutasin geelmaatriksi mahu: Vg = k·Vt = 72,63 · 0,1 = 7,263cm3 ja maksimaalse eludeerimismahu
Vxmax = Vt Vg = 72,63 7,273 =65,357 cm3
· Arvutasin fraktsioonide üldarvu teades, et ühe fraktsiooni maht on 2ml. n = Vxmax/2 = 65,357 / 2 33
· Nummerdasin katseklaasid
Praktiline töö