"2x200" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

IV Inkubatsioon primaarse antikehaga 1. Valmistada primaarse antikeha lahjendused (kulub 200 µl ühe klaasi kohta) 0,2% BSA- PBS lahuses a. 40 µl 2% BSA lahust b. 360 µl 1x PBSi c. Mouse anti tubuliin 1:500 0,8 µl, segada. 2. Lisada rakkudele ja inkubeerida 60-90 minutit toatemperatuuril. 3. Pesta 3 korda 5 minutit á 1 ml PBS-Tweeniga. V Inkubatsioon sekundaarse antikehaga. 1. Valmistada sekundaarse antikeha lahjendused 0,2% BSA-PBS lahuses (vaja on kahe klaasi jagu, seega kokku 2x200=400µl). a. 40 µl 2% BSA lahust b. 360 µl 1x PBSi c. Goat anti mouse Alexa546 1:2000 0,2 µl, segada. 2. Inkubeerida 45-60 minutit toatemperatuuril, kaitsta valguse eest. 3. Pesta 3 korda 5 minutit 1 ml PBS-Tweeniga. 4. Pesta 2 korda 5 minutit 1 ml PBSiga. 5. Pesta 1 kord 1 ml milliQ (destilleeritud) veega. VI Alusklaasidele panemine ehk sulundamine 1. Kirjuta alusklaasile oma nimi ja kuupäev, samuti kasutatud antikeha. 2