Meditsiinilise mikrobioloogia praktikum
Võimalik on
64
konstrueerida sondi perekonna, liigi, isegi teatud geeni eristamiseks (näiteks virulentsust või RR
determineerivat).
Hübriidi moodustanud nukleotiidahelaid peab olema võimalik avastada ja eristada nukleiinhappe
mittehübridiseerunud lõikudest. Selleks kasutatakse diagnostilist reporter-molekuli ehk märgistatud
DNA või RNA (moodustabki sondi!), mis on kas:
• radioaktiivsed (32P, 125I, 35S) või
• mitteradioaktiivsed (biotiin-avidiin, digoxigeniin,fluorokroomid).
Radioaktiivselt märgistatud sondide kasutamine kliinilises diagnostikas on komplitseeritud. Rohkem on
kasutamist leidnud biotinülatsioon, mida on võimalik avastada avidiinile seotud ensüümi lisamisega.
Hübriidi sedastatakse kromogeense substraadi lõhustamise käigus toimuva värvusreaktsiooni abil, mida
hinnatakse visuaalselt või spektrofotomeetriliselt