Molekulaarbioloogia
Reaktsiooni labiviimiseks on vajalik teada uuritava
DNA loigu otste nukleotiidset jarjestust.
Reaktsiooni kaivitamiseks kasutatakse kahte oligonukleotiidset vaiksest arvust (8..30)
nukleotiidist koosnevat praimerit (ingl. k. primer), mis kumbki vastavad uhe
komplementaarse DNA ahela alguse nukleotiidsele jarjestusele ja talitlevad kui ensuumi
substraat, kuna neil on vabad otsad uute nukleotiidide sidumiseks.
PCR pohietapid on jargmised:
1) topeltahelalise DNA denaturatsioon kaheks uksikahelaks korge temperatuuriga (90-95 °C;
40-60 sek);
2) praimerite hubridiseerimine e "istutatamine" kummalegi uksikahelale, milleks viiakse
temperatuur alla ca 50 °C juurde 30 sekundiks;
3) komplementaarse DNA ahela suntees DNA-polumeraasi toimel (72 °C juures, aeg soltub
loigu pikkusest, kuid ca 1-3 min). Kasutatav ensuum on termostabiilne ja on isoleeritud
kuumaveeallikates elavatest bakteritest (nt Thermus aquaticus, temalt saadud ensuumi
nimetatakse TaqI).
annaabi.ee 
