kiirelt (tegin seda käes), kuna külmutussegi sisaldab DMSO-t, mis on soojana rakkudele toksiline. 4. Järgmisena võtta 15 ml tuubist automaatpipetiga 0,5 ml sooja söödet ja lisada viaali, tõsta rakud 15 ml tuubi ringi. Fuugida rakud põhja 5 min 1000 rpm toatemperatuuril (kuna rakud on õrnad, kiirus ei tohi olla üle 1000 rpmi). 5. Pärast fuugimist tuleb tõmmata vaakumpumbaga sööde rakkudelt, kasutades Pasteuri pipeti ning steriilset otsikut. 6. Tuubile rakkudega lisada 0,5 ml söödet (6 cm tassilt), suspendeerida ning panna tagasi tuubist tassile. Teha tassiga 8-kujulisi liigutusi, et rakud tassil ühtlaselt jaotuksid ning asetada oma tass CO2 inkubaatorisse. 90. Enamus rakuliine vajab kasvamiseks temparatuuri 37 °C ja pH-d vahemikus 7,2 – 7,4. Selliste tingimuste tagamiseks kasutatakse spetsiaalseid inkubaatorkappe, kus lisaks vajalikule temp. on ka kõrgem CO2 sisaldus (5%), mis võimaldab stabiilse pH säilitamise. 91. 92
Võtsin külmast krüoviaaliga NIH3T4 rakud ja sulatasin käes kiirelt (DMSO!) Lisasin viaali 0,5 ml sooja söödet ja tõstsin rakud 15 ml tuubi ringi. Fuugisin rakud põhja 5 min 1000 rpm toatemperatuuril (tegemis on õrna rakkudega, seega fuugimine peab olema madala kiirusega) Tõmmasin sööde vaakumpunbaga nii, et rakud jäid põhja Tassilt tuubile rakkudega lisasin 0,5 ml söödet, suspendeerisin ning panin tagasi tuubist tassile, ühtustasin rake ja panin tass CO2 inkubaatorisse, kus tingimused – temperatuur, rõhk ja CO2 % onn sarnased tingimustega organiismi sees, eh 37 °C ja CO2 5% - stabiliseerib pH. 2. Praktikum – rakkude paljundamine Selleks, et arvutada lahjendused ja veenduda et rakud ei ole surnud, on vaja hinnata nende tihedust ja paiknemist. Selleks kasutataske mikroskoobi:
peab ka isas-ja emassugupoolega jarglasi sundima vordselt. Ka tegelikkuses on see nii. Sugukromosoomidega maaratakse primaarsed sugutunnused (sugunaarmete ehk gonaadide areng). Lindudel, roomajatel ning kaladel ja liblikatel on heterogameetseks sugupooleks emased. Selleks, et eristada sellist soomaaramise tuupi eelnevatest, tahistatakse nende sugukromosoome e gonosoome isastel ZZ ja emastel ZW. Ligilahedane sellele soomaaramise tuubile on ZZ-Z0 tuup monedel liblikatel, kus emastel on ainult uks sugukromosoom (Z0) ja isastel molemad kromosoomid (ZZ). Imetajatel (ka inimesel) maarab Y-kromosoom alati isassugupoole arengu, vaatamata sellele, kas isendil on uks voi mitu X-kromosoomi (sugukromosoomidega XY, XXY, XXXY isendid on alati isased). Partenogenees on embruo arenemine viljastamata munarakust. Vastavalt sellele, kas lahterakk on haploidne voi diploidne, eristatakse haploidset ja diploidset partenogeneesi.
Kui naidisdiagrammi valimus sobib, ei pea selles dialoogiaknas muudatusi tegema. Seejarel vajutage nupule Next. 3. samm Chart Options - lulitage sisse/valja moningad standardsed korraldused vastavalt valjavalitud graafiku tuubile. Valides neid korraldusi, kontrollige naidiselt, kas tulemus on sobiv. 4. samm Chart Location maarake AS OBJECT IN (kas graafik lisatakse monele olemasolevale toolehele) voi AS NEW SHEET (kas graafik paigutatakse uuele toolehele). Viimasest sammust valjumiseks vajutage nupule Finish. 36. Graafikute kujundamine