Kordamisküsimused 1.prax: · Mis on rakuliin ja rakkude primaarkultuur, mille poolest erinevad? Primaarne rakukultuur on otseselt koest eraldatud rakkudest koosnev ja piiratud jagunemisvõimega kloon. Rakuliin on imortaliseeritud kloon, mis on võimeline paljunema/ jagunema piiramatult. Immortaliseeritud liine saab kas iseeneslike mutatsiooni tagajärjeliste transformatsioonide kaudu, ka eraldades rakke kasvajatest. Tekitada kunstlikult telomeraasi sisseviimisel rakku. Rakuliin sageli aneupolidne- kromosoomide arv normaalsest erinev (tavaliselt suurem). Eri rakutüübid transformeeruvad eri sagedusega, suured liikidevahelised erinevused. · Milleks on söötmesse lisatud seerum, antibiootikumid ja aminohapped? Et rakud end hästi tunneksid. Seerum-keskkond + mitogeenid=kasvufaktorid ja muud proliferisatsiooniks vajalikud substansid. Antibiootikumid-et bakterid vohama ei hakkaks, meie rakud olid antibiootikumile resistentsed (vist). Aminohapped-
Et bakterid vohama ei hakkaks 2. Milleks on söötmesse lisatud pH indikaator? Enamus rakuliine vajab kasvamiseks temperatuuri 37°C ja pH-d vahemikus 7,2-7,4. pH indikaatorina kasutatakse fenoolpunast. pH muutumisel happelisemaks muutub indikaator kollaseks ja pH muutumisel aluselisemaks muutub indikaator lillamaks. Rakud taluvad happelist keskkonda paremini kui aluselist. 3. Nimeta sagedasemaid rakukultuuri saastajaid. Pärm, bakterid, mükoplasma, viirused, teised rakuliinid 4. Mis on rakuliin ja rakkude primaarkultuur, mille poolest need erinevad? primaarsed kultuurid koest eraldatud, paljunevad piiratud arv kordi (meie majas kasutatakse näiteks roti neuroneid) rakuliinid surematud st. paljunevad piiramatu arv kordi, kuid peab siiski arvestama asjaoluga, et aja jooksul rakud siiski muutuvad. Pärinevad reeglina embrüonaalsetest või kasvajalistest kudedest. Tavaliselt ostetakse rakupangast (ATCC, DSMZ) ja paljundatakse ise edasi
paljunemine ja voime areneda koigi kudede rakkudeks. Seetottu on loote rakutuumast jarglase loomine suhteliselt lihtsam. Kui Dolly saadi 277. katsel, siis 1999.a jaanuaris sundinud kolmikvasikate loomine onnestus umbes 50. katsel. Koige uldisemalt toimub looterakkude abil kloonimine jargmiselt: 1) Lootelt parit rakke kasvatatakse algul katseklaasis, lisades neile kasvu ja arengut stimuleerivaid aineid 2) Valitakse valja sobivate pusivate omadustega rakuliin (rakukloon) 3) Viljastatud munarakust eemaldatakse tuum 4) Kloonitud looterakk uhendatakse elektriimpulsi abil munarakuga 5) Munarakk hakkab jagunema, arenedes mitmekumnest rakust koosnevaks embruoks 6) Embruo siiratakse lehma emakasse, kus ta areneb vasikaks. Sarnaselt toimides on voimalik uhe rakuklooni rakkudest saada piiramatul hulgal vasikakoopiaid, kellel koigil on uhesugused geneetilised omadused. Kaesolevaks ajaks on juba loodud embruokloonid, mille rakud sisaldavad inimese
enamus X kromosoomi pikemast õlast. Kuna eelnevalt oli teada, et geen HPRT paikneb X kromosoomis, oli nüüd selge, et see geen paikneb X kromosoomi pikemas õlas. Need hübriidsed rakud ekspresseerisid ka fosfoglütseraadi kinaasi (PGK) ning glükoos-6- fosfaadi dehüdrogenaasi (G6PD), mille geenid olid samuti eelnevalt X kromosoomi lokaliseeritud. Järelikult sai nüüd ka nende kahe geeni täpsem asukoht selgeks. Sama rakuliin ekspresseeris ka nukleosiidi fosforülaasi (NP), mille geeni kohta oli eelnevalt teada, et see paikneb 14-ndas kromosoomis. Seega sai nüüd välistada võimaluse, et NP-d kodeeriv geen paikneb 14-nda kromosoomi selles osas, mis oli translokeerunud X kromosoomi. Edasise analüüsi käigus töötati juba selliste translokatsiooni sisaldavate kromosoomidega, kus X kromosoomist olid üle kandunud lühemad segmendid. Nii oli
Loomsed rakud vajavad rikastatud söödet: aminohappeid, vitamiine, kasvufaktoreid, insuliini, transferriini. Tavaliselt kasvavad tasapinnal, mis on kaetud spetsiaalse maatriksiga. Selline maatriks on kinnituskohaks ECMile - hüaluroonhape, kollageen ja teised ECM valgud. 6. Defineeri primaarne rakukultuur - saadud loomsetest kudedest; suurem osa loomsest koest eraldatud rakke jaguneb piiratud arv kordi piiratud aja jooksul (keskmiselt 50 jagunemist), pärast seda rakud surevad ja rakuliin - "transformeeritud rakud" jagunevad lõpmatult ja selliseid ühest rakust alguse saanud immortaliseeritud kloone nimetatakse rakuliiniks. Rakuliinid sageli aneuploidsed - kromosoomide arv erinev normaalsest. Rakuliinid pole tavaliselt diferentsieerunud, osadel siiski algse koe funktsioonid. 7. Mis on transformatsioon transformeeritud rakud jagunevad lõpmatult, transformatsiooni erinevad viisid? Võib tekkida iseeneslikult mutatsioonide tagajärjel,
HPRT geeni täpsem lokaliseerimine X kromosoomi pikka õlga 14-X translokatsiooni abil. Translokatsioon on toimunud x-kromosoomi ja 14. kromosoomi vahel: enamik x-kromosoomi pikast õlast on translotseerunud 14.kromosoomi otsa ning väike segment 14.kromosoomi otsast on translotseerunud x- kromosoomi otsa. Seda translokatsiooni sisaldavaid inimese rakke hübriiditi hiire rakkudega. Peale hübriidrakkude selektsiooni HAT-söötmel saadi rakuliin, mis sisaldas vaid ühte inimese kromosoomi – 14. kromosoomi kuhu oli liitunud enamus x-kromosoomi pikast õlast. Kui eelnevalt oli teada et HPRT geen paikneb x-kromosoomis, siis käesolevad katsed näitasid, et ta asub x-kromosoomi pikas õlas. Samasse õlga paigutusid ka fosfoglütseraadi kinaasi PGK ja glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaasi G6PD geenid. 27 41. Millist tüüpi nukleiinhape võib olla päriliku informatsiooni kandjaks? Nukleiinhapped jagunevad: DNA ja RNA
kromosoomi pikemast õlast. Kuna eelnevalt oli teada, et geen HPRT paikneb X kromosoomis, oli nüüd selge, et see geen paikneb X kromosoomi pikemas õlas. Need hübriidsed rakud ekspresseerisid ka fosfoglütseraadi kinaasi (PGK) ning glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaasi (G6PD), mille geenid olid samuti eelnevalt X kromosoomi lokaliseeritud. Järelikult sai nüüd ka nende kahe geeni täpsem asukoht selgeks. Sama rakuliin ekspresseeris ka nukleosiidi fosforülaasi (NP), mille geeni kohta oli eelnevalt teada, et see paikneb 14-ndas kromosoomis. Seega sai nüüd välistada võimaluse, et NP-d kodeeriv geen paikneb 14-nda kromosoomi selles osas, mis oli translokeerunud X kromosoomi. Edasise analüüsi käigus töötati juba selliste translokatsiooni sisaldavate kromosoomidega, kus X kromosoomist olid üle kandunud lühemad segmendid. Nii oli võimalik uuritavad geenid X kromosoomis reastada.
kromosoomi pikemast õlast. Kuna eelnevalt oli teada, et geen HPRT paikneb X kromosoomis, oli nüüd selge, et see geen paikneb X kromosoomi pikemas õlas. Need hübriidsed rakud ekspresseerisid ka fosfoglütseraadi kinaasi (PGK) ning glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaasi (G6PD), mille geenid olid samuti eelnevalt X kromosoomi lokaliseeritud. Järelikult sai nüüd ka nende kahe geeni täpsem asukoht selgeks. Sama rakuliin ekspresseeris ka nukleosiidi fosforülaasi (NP), mille geeni kohta oli eelnevalt teada, et see paikneb 14-ndas kromosoomis. Seega sai nüüd välistada võimaluse, et NP-d kodeeriv geen paikneb 14-nda kromosoomi selles osas, mis oli translokeerunud X kromosoomi. Edasise analüüsi käigus töötati juba selliste translokatsiooni sisaldavate kromosoomidega, kus X kromosoomist olid üle kandunud lühemad segmendid. Nii oli võimalik uuritavad geenid X kromosoomis reastada.
Difusiooni kiirus- määratud ära molekuli suuruse, laengu ja polaarsusega. Membraanid töötavad selektiivse barjäärina. Difusiooni suund- määratud ära entroopiliste faktoritega, st kontsentratsioonide erinevustega kahel pool membraani. (joonised!) Difusioon- toimub kontsentratsiooni alanemise suunas, kiirus on võrdeline gradiendi suurusega ning sõltub konkreetse molekuli omadustest (steroidid, hapnik, vesi...) 6. Mis on hübridoom ja kuidas ning milleks neid tekitatakse: Hübridoom on rakuliin, mis on saadud antikehasid tootva B-lümfotsüüdi ja lümfotsütaarsest kasvajast pärineva raku ühendamisel. Kasutatakse monoklonaalsete antikehade tootmiseks. 7. Mida nim membraani sulamistemperatuuriks: Liposoomide lahuse kuumutamisel membraanid lähevad hästi korrapärase geelisarnase struktuuri faasist üle mobiilsemasse vedelasse faasi. Seda nähtust nim faaside üleminekuks. Mida lühema ahelaga ja vähem küllastunud on lipiidid, seda madalamal temperatuuril üleminek toimub
14-ndat kromosoomi, kuhu oli liitunud enamus X kromosoomi pikemast õlast. Kuna eelnevalt oli teada, et geen HPRT paikneb X kromosoomis, oli nüüd selge, et see geen paikneb X kromosoomi pikemas õlas. Need hübriidsed rakud ekspresseerisid ka fosfoglütseraadi kinaasi (PGK) ning glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaasi (G6PD), mille geenid olid samuti eelnevalt X kromosoomi lokaliseeritud. Järelikult sai nüüd ka nende kahe geeni täpsem asukoht selgeks. Sama rakuliin ekspresseeris ka nukleosiidi fosforülaasi (NP), mille geeni kohta oli eelnevalt teada, et see paikneb 14-ndas kromosoomis. Seega sai nüüd välistada võimaluse, et NP-d kodeeriv geen paikneb 14- nda kromosoomi selles osas, mis oli translokeerunud X kromosoomi. Edasise analüüsi käigus töötati juba selliste translokatsiooni sisaldavate kromosoomidega, kus X kromosoomist olid üle kandunud lühemad segmendid. Nii oli võimalik uuritavad geenid X kromosoomis reastada. 7
Seetõttu on loote rakutuumast järglase loomine suhteliselt lihtsam. Kui Dolly saadi 277. katsel, siis 1999.a. jaanuaris sündinud kolmik- vasikate loomine õnnestus umbes 50. katsel. 55 Kõige üldisemalt toimub looterakkude abil kloonimine järgmiselt: 1) Lootelt pärinevaid rakke kasvatatakse algul katseklaasis, lisades neile kasvu ja arengut stimuleerivaid aineid 2) Valitakse välja sobivate püsivate omadustega rakuliin (rakukloon) 3) Viljastatud munarakult eemaldatakse tuum 4) Kloonitud looterakk ühendatakse elektriimpulsi abil munarakuga 5) Munarakk hakkab jagunema, arenedes mitmekümnest rakust koosnevaks embrüoks 6) Embrüo siiratakse lehma emakasse, kus ta areneb vasikaks. Sarnaselt toimides on võimalik ühe rakuklooni rakkudest saada piiramatul hulgal vasikakoopiaid, kellel on kõigil ühesugused geneetilised omadused.
· antibiootikumid · Konfluentne (samasuunaline, koos kulgev) kultuur · Osad kasvavad ka suspensioonis ja 3D-geelis Rakkude kasvatamiseks on vaja: · Tagada kontrollitud keskkond (inkubaatorkapid) · Tagada steriilsus (vertikaalne laminaarne õhuvool) · Tagada töötaja turvalisus patogeensete mikroorganismide või rakukultuuride korral (horisontaalne õhukardin) · Steriilsed töövahendid 6. Defineeri primaarne rakukultuur ja rakuliin. · Primaarsed rakukultuurid on saadud loomsetest kudedest · Suurem osa loomsest koest eraldatud rakke jaguneb piiratud kordi piiratud aja jooksul (keskmiselt 50 jagunemist), pärast seda rakud surevad · Nn. "transformeeritud rakud" jagunevad lõpmatult ja selliseid ühest rakust alguse saanud immortaliseeritud kloone nimetatakse rakuliiniks · Rakuliinid sageli aneuploidsed- kromosoomide arv erinev normaalsest
Weissmannist alates võib eristada soma ja idurakke. W. postuleeris idurakkude igavese elu ja soma surma. See on muidugi õige - kuid vaid pooltele taksonitele. Väga paljud liigid on võimelised somaatiliseks embrüogeneesiks. Taimed eelkõige. Ja just neil liikidel, kus reproduktsioon on võimalik enam kui ühest rakutüübist lähtuvalt, on võimalik rääkida valikust nende vahel. Vähkkasvaja on kena näide mutatsioonist põhjustatud selektiivse eelise kohta - vastav maligniseerunud rakuliin hakkab elama teiste arvel. selektsioon võib töötada indiviidi tasemel See on muidugi üldtuntud ja põhiline, nii et eraldi peatuda pole hetkel mõtet. selektsioon grupi tasemel Juttu on ikka lähedastest sugulastest ja seda kutsutakse kin selection. Kui grupp kooseluga soodustab järeltulijate arvukust, kutsutakse seda bioloogiliseks altruismiks. Kas bioloogiline altruism võib olla ka vastassuunaline - vähendada üksikindiviidide reproduktiivset potensiaali?
annaabi.ee 
Sisene Facebook'ga
Sisene Google'ga
Sisene LinkedIn'ga
