Molekulaar- ja rakubioloogia
3) PBS-Tween: 1x PBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50 ml
o 5 ml 10x PBSi
o 45 ml MQ
o 50 μl Tween
4) Permeabiliseerimislahus: 50 mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 1 ml. Raku
membraan permeabiliseeritakse ehk muudetakse läbilaskvaks detergendiga (Triton-X-100,
saponiin, jt.), et antikehad rakku ja eelkõige rakutuuma pääseksid. See etapp on oluline siis,
kui meil on vaja vaadata mingi valgu ekspressiooni raku sees. Kui me vaatame
valkguekspessiooni rakupinnal (nt. FACS), siis jätama see etapp vahele.
o 50 μl 1M NH4Cl Ammoniumkloriid neutraliseerib jääk-PFA
o 50 μl 10% Triton X-100 - detergent, mis lahustab osaliselt rakumembraanide
lipiidid, et antikehad hiljem rakku pääseks.
o 100 μl 10x PBSi
o 800 μl MQ
5) Blokklahus: 2% BSA, 0,1% NaN3 PBSis, 2 ml.
o 0,04 g BSA-d
o 20 μl 10% NaN3 NaN3 kasutatakse konservandina (takistab bakterite