"transformatsioonipuhvirsse" - 1 õppematerjal

Mikroobifusioloogia

mikropoorid ning DNA transporditakse aktiivselt rakku. E. coli transformatsiooni ajal hoitakse rakke 37 ­ 42 kraadi juures 0,5 ­ 3 minutit. Optimaalseks peetakse 42 kraadi ja 0,5 minutit. Temperatuurisokile järgneb rakkude hoidmine 2-5 minutit jääl ning kasvatamine rikkal söötmel kasvuks temperatuurioptimumi juures. Grampositiivsete bakterite korral vähendatakse rakukesta muralüütiliste ensüümidega või EDTA lisamisega transformatsioonipuhvirsse. Tekitatakse nn sfäro- või protoplastid ­ elusad rakud, mille peptiidoglükaankiht on nõrgendatud nii, et tekivad sfäärilised rakud. G(+) bakterite puhul on oluline, et transformatsioonipuhver oleks isotooniline. Streptococcus faecium'i korral suurendab sfäroplasti teket 80 mM NaCl lisamine, Lactobacillus lactis'el saadakse sfäroplastid -amülaasi lisamisel. Mõnikord lisatakse G(+) bakterite söötmesse