Peale proovi võtmist panin reaktsiooniseguga tuub kiiresti tagasi termostaati. Täpselt 5, 10 ja 15 minuti pärast võtsin sama pipetiga 2 ml reaktsioonisegu teise tuubi ja loksutasin. Reaktsiooniproduktide sisalduse määramine ja aktiivsuse arvutamine Proovidega tuubid jätsin sademe formeerumiseks 1015 minutiks seisma. Edasi proovid panin tsentrifuugisse ja pärast seda filtreerisin neid. Sain selgeid lahuseid ja määrasin nende optilist tihedust spekrofotomeetriga lainepikkusel = 280 nm (D280). Kaliibrimisgraafikult leidsin vastavalt proovide optilise tiheduse väärtustele D280 neis sisalduva türosiini kontsentratsioon (mg/ml või mol/ml). Saadud katseandmete alusel koostatan graafik, mis väljendab türosiini kontsentratsiooni ja reaktsiooni kestvuse vahelist sõltuvust CTyr = f(t) ja arvutan ensüümipreparaadi proteolüütiline aktiivsus, mis A vastab valemile: 3 C Tyr10 V 1V 22 A= t181V 3g
jaotuks. Kui proov on sisestatud, avasin väljavool ja lisasin kiiresti pipeti abil väike kogus eluneti (NaCl). Seda tegevust korratakse kuni proov on täidisesse imbunud. Seejärel lisasin suurema koguse voolutuslahust. Kui esimene värviline riba hakkas lähenema kolonni alumisele osale alustasin eluaati koguma valmispandud katseklasidesse. Elueerimist lõpetasin, kui väljuv eluaat on värvitu. Analüüsisin võetud proovid spekrofotomeetriga, tegin vastavaid arvutusi ja kõveraid. Mõõtmised Sephadex'i mark = G75 k = 0,1 l = 24 cm d = 2 cm Vt = r2l = 75,4 cm3 Vg = k * Vt = 7,54 cm3 Vx max = Vt - Vg = 67,86 cm3 n = Vx max / 2 = 33,93 Katseandmed Fraktsiooni Elueerimismaht Optiline Lainepikkus number (ml) tihedus (A) (nm) 1 20 0,0089 670
annaabi.ee 
