Molekulaarne ja rakenduslik immunoloogia
diagnostikas.
Immunoblot-analüüs koosneb kolmest etapist. Esiteks toimub valkude elektroforees, mille tulemusena
lahutatakse antigeenid, kasutatakse SDS-PAGE. Toimub ca 1h. Teiseks etapiks on blotting e lahutatud
antigeenide ülekanne geelist (SDS-PAGE) nitrotselluloosfiltrile. Kolmandaks viiakse läbi antigeen-
antikeha reaktsioon. Selleks blokeeritakse nitrotselluloos „neutraalsete“ valkudega (nt rasvatu
piimapulber). Primaarne antikeha lisatakse süsteemi, st seerumlahjendus. Seejärel lastakse sellel
seista, st inkubatsioon seerumlahjendusega. Pärast inkubatsiooniaega detekteeritakse tekkinud
antigeen-antikeha kompleksid. Sekundaarne antikeha on märgistatud kas ensüümmärgistusega
(peroksüdaas, alkaalne fosfataas), mille korral toimub detekteerimine kromogeensuse või
kemoluminestsentsi alusel, või radioaktiivse isotoobiga, detekteeritakse autoradiograafia abil.
annaabi.ee 
