"permeabiliseeritakse" - 1 õppematerjal

Molekulaar- ja rakubioloogia

Fikseerimiseks on vaja valmistada lahused: 1) Fikseerimislahus: 4% PFA 1x PBSis, 10 ml o 0,4 g PFA puru o 1 ml 10x PBSi o 9 ml vett 2) 1x PBS, 50 ml o 5 ml 10x PBSi o 45 ml MQ3 3) PBS-Tween: 1x PBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50 ml o 5 ml 10x PBSi o 45 ml MQ o 50 μl Tween 4) Permeabiliseerimislahus: 50 mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 1 ml. Raku membraan permeabiliseeritakse ehk muudetakse läbilaskvaks detergendiga (Triton-X-100, saponiin, jt.), et antikehad rakku ja eelkõige rakutuuma pääseksid. See etapp on oluline siis, kui meil on vaja vaadata mingi valgu ekspressiooni raku sees. Kui me vaatame valkguekspessiooni rakupinnal (nt. FACS), siis jätama see etapp vahele. o 50 μl 1M NH4Cl Ammoniumkloriid neutraliseerib jääk-PFA o 50 μl 10% Triton X-100 - detergent, mis lahustab osaliselt rakumembraanide