Lainepikkus max Absorptsioon A (nm) 1 536 0,0317 2 453,5 82,5 0,0468 3 426,0 27,5 0,0518 4 414,0 12 0,0574 5 365,5 48,5 0,0673 Võrdlesin uuritava lahuse neeldumisspektril esinevaid neeldumismaksimumide asukohti teatmeteostes leiduvate andmetega erinevate karotenoidide neeldumismaksimumide paiknemise kohta ei olnud võimalik kindlaks määrata, milline karoteeni isomeer või ksantofüll ekstraktis domineerib. Viga tuleneb suure tõenäosusega sellest, et kasutasin liiga palju ekstrahenti ja minu apelsinikoore ekstrakt oli selle tulemusena äärmiselt hele, võib öelda, et praktiliselt värvitu. Oleksin pidanud saama tulemused, mis oleksid sobitunud lainepikkustega 416 nm, 440 nm ja 468 nm
absoptsiooni (A) e optilise tiheduse (D) täpsed väärtused. Trükkisin neeldumisspektri välja. Lainepikkus max Absorptsioon A (nm) 1 426 0,1508 2 450 0,2000 3 476 0,1755 Võrdlesin uuritava lahuse neeldumisspektril esinevaid neeldumismaksimumide asukohti teatmeteostes leiduvate andmetega erinevate karotenoidide neeldumismaksimumide paiknemise kohta . Selgus, et antud tulemused on väga sarnased -karoteeni omadele (425; 451; 482 Karotenoidi sisalduse arvutamine (kvantitatiivne analüüs) Karotenoidi sisalduse arvutamiseks kasutatakse neeldumisspektri analüüsimisel saadud andmeid ehk neeldumismaksimumidele max vastavaid absorptisooni (A) väärtusi. Reeglina
Spektrofotomeetri ekraanile joonistub uuritava lahuse neeldumisspekter, millel kursori nihutamisega näidatakse ära ja märgitakse need lainepikkused, kus paiknevad iseloomulikud neeldumismaksimumid ja maksimumidele vastavad absorptsiooni täpsed väärtused. Seejärel trükitakse neeldumisspekter välja. 478 nm A 0,5590 451,5 nm A 0,6255 platoo 423-430 nm A 0,4480- 0,4722 Spektri analüüsimisel võrreldakse uuritava lahuse neeldumisspektril esinevate neeldumismaksimumide asukohti teateteostes leiduvate andmetega erinevate karotenoidide neeldumismaksimumide paiknemise kohta. Antud proovis on -karoteen Karotenoidi sisalduse arvutamine A- absorptsiooni väärtus, mis vastab arvutuse aluseks valitud neelumismaksimumile (kõrgeimale ,,tipule" vastav A väärtus) - vaadeldava karotenoidi ekstinktsioonikoefitsient (1%-lise karotenoidi lahuse absorptsioon) sama juures V- ekstrakti kogumaht, ml d- kasutatud ekstrahendi tihedus, g/c(0,65 g/c)
ekstrakti saamiseni. Neeldumisspektrite võtmine ja analüüs Spekter mõõdetakse vahemikus 350-600 nm, kasutades võrdluslahustina puhast lahustit. Spektrofotomeetri isekirjutilt sain uuritava lahuse neeldumisspektri. Neeldimismaksimumid paiknesid järgnevatel lainepikkustel: 465,5 nm/ 1,247 A 436,5 nm/1,379 A 415,0 nm/0,994 A Puhta -karoteeni vastavad lainepikkused on: 482 nm; 451 nm; 425 nm. Puhta - karoteeni vastavad lainepikkused on 475 nm; 445 nm; 420 nm. Minu uuritava proovi neeldumismaksimumide lainepikkused on lähemal pigem - karoteeni vastavatele väärtustele, siis arvutan -karoteeni sisalduse proovis. Kuna 436,5 nm kohta ei leidnud E1cm 1% väärtust, siis teen arvutuse 445 nm kohta. -karoteeni sisaldus uuritavas proovis: K=(D*V*d*103)/( E1cm 1% *g), Kus D- ekstrakti optiline tihedus, E1cm 1% 1% -karoteeni lahuse ekstinktioon lainepikkusel 450nm, V-ekstrakti kogumaht, d-ekstrakti tihedus g/cm3 , g-uuritava proovi mass, 103-tegur üleminekuks milligrammidele
Seejärel võtsin iga 5 minuti järel taas 3ml reaktsioonisegu kuni neid oli kokku neli. Reaktsioonisegu pipteerisin katseklaasi, kus oli TKÄ lahus ja loksutasin ja nii neli korda. 5. Lasin proovidel seista ja seejärel filtrisin kõik neli proovi puhastesse katseklaasidesse. 6. Määrasin spektromeetril nende optilised tihedused. Proovide optilised tihedused: D0 = 0,386 A D1 = 0,561 A D 2 = 0,853 A D3 = 1,156 A Aromaatset tuuma sisaldavad aminohaooed on tänu 280nm piirkonnas paiknevate neeldumismaksimumide spektrofotomeetriliselt detekteeritavad. Hüdrolüüsi produktide sisaldus avaldatakse türosiini mikromoolidena. Õppejõult saadud kaliibrimisgraafiku alusel sain türosiini kontsentratsiooniks: C 0 =0,06 mg/ml 0s C1 =0,09 mg/ml 300s C 2 =0,1370mg/ml 600s C 3 =0,1840mg/ml 900s Arvutan preparaadi proteolüütilise aktiivsuse vastavalt järgmisele valemile: C 10 3 V1 2 V 2 A=
Spektrofotomeetri ekraanile joonistub uuritava lahuse neeldumisspekter, millel kursori nihutamisega näidatakse ära ja märgitakse protokolli need lainepikkused, kus paiknevad iseloomulikud neeldumismaksimumid ja neile vastavad optilise tiheduse väärtused. Kolm neeldumismaksimumi: 1. =502,0 nm 0,340 A 2. =471,0 nm 0,418 A E1%= 3450 3. =445,5 nm 0,306 A Võrrelda uuritava lahuse neeldumisspektril esinevate neeldumismaksimumide asukoti teatmeteostes leiduvate andmetega ning anda hinnang, milline karoteeni isomeer domineerib ning arvutada selle sisaldus uuritavas materjalis. *Tomatis domineerib lükopeen, mille neeldumismaksimumid on 506 nm, 474 nm ja 446 nm. Karotenoidi sisalduse arvutamine Arvutustes võetakse aluseks selline absorbtsiooni väärtus, mis vastab neeldumisspektri kõige kõrgemale tipule. Karotenoidi sisalduse leidmiseks kasutatakse järgmist valemit: Järeldus:
Karotenooidid on võimalikult ekstraheerida uuritavast ainest organiliste lahustiga ja määrata optilise tiheduse järgi nende kontsentratsioon aines. Saadud andmed ei lange kokku teatmeteosest leidnud andmetega. Selle põhjuseks on mittetäielik karatenoidide ekstraheerimine ja mõned vigastused,. Lisaks sellele pipras võivad esineda ka teise karotenoidid, kuid pika beta karoteeni sisalduse tõttu ja nende neeldumismaksimumide kokkulangemine beta karoteeni neeldumismaksimumtega takistab nende avastamist.
Saadud piikide tipud: Piigi tipp Lainepikkus (nm) Optiline tihedus 1. piigi tipp 426 0,0615 2. piigi tipp 451 0,0793 3. piigi tipp 476 0,0685 18. Trükin neeldumisspekter välja ja järgneb spektri analüüsimine. 19. Võrdlen uuritava lahuse neeldumisspektril esinevate neeldumismaksimumide lainepikkuse teatmeteostes leiduvate andmetega erinevate karotenoidide neeldumismaksimumide paiknemise kohta. (Heksaanis) Karotenoid Neeldumismaksimumid E%1cm -karoteen 420; 445; 475 2735 (445) -karoteen 425; 451; 482 2650 (451) Luteiin 420; 447; 477 -
kasutatakse puhast petrooleetrit. · Töötatakse klaasküvettidega, sest mõdetakse nähtava valguse osas. · Spektrofotomeetri ekraanile moodustub uuritava lahuse neeldumisspekter, millel näidatakse ära neel lainepikkused, kus paiknevad neeldumismaksimumid ja maksimumidele vastavad absorptsiooni täpsed väärtused. · Spektrit analüüsitakse võrreldes uuritava lahuse neeldumisspektril esinevate neeldumismaksimumide asukohti teatmeteostes leiduvate andmetega erinevate karotenoidide neeldumismaksimumide paiknemise kohta. · Tehakse järeldus, kas on tegu puhta -karoteeniga või karotenoidide seguga. · Kui on segu seguga, antakse hinnang, milline karoteeni isomeer või ksantofüll ekstraktis domineerib ning arvutatakse selle sisaldus uuritavas materjalis Karotenoidi sisalduse arvutamine
TalTech Keemia ja biotehnoloogia instituut YKA0060 Instrumentaalanalüüs SFM Spektrofotomeetria Õpperühm: Töö teostaja(d): Õppejõud: Töö teostatud (kuupäev): 1 Töö eesmärgid I osa eesmärgid: 1. Aine spektri mõõtmine ja iseloomustamine. Neeldumismaksimumide ja neeldumismiinimumide kindlaks määramine. 2. Uurimine, kas aine spektrinäitu saab ennustada teades aine värvi. 3. Uurimine, kas aine spektrinäit sõltub keskkonna pH-st. 4. Uurimine, kas aine värv on mono – või polükroomne kasutades spektrinäitu. II osa eesmärgid: 1. Määrata KMnO4 ja K2Cr2O7 kontsentratsioonid kontroll-lahuses. 2. Kalibreerimissirge konstrueerimine ja iseloomustamine kasutades
Spektromeeter nullitakse kasutatud ekstrahendiga. Töötada võib klaasküvettidega, sest mõõtmine toimub nähtava valguse lainepikkusel. Spektrofotomeetri ekraanile joonistub uuritava lahuse neeldumisspekter. Sealt loetakse lainepikkused, kus paiknevad iseloomulikud neeldumismaksimumid (max) ja maksimumidele vastavad absorptsiooni (A) e optilise tiheduse (D) täpsed väärtused. Järgneb spektri analüüs. Spektri analüüsimisel võrreldakse uuritava lahuse neeldumisspektril esinevate neeldumismaksimumide asukohti (lainepikkusi) teatmeteostes leiduvate andmetega, järeldatakse kas tegemist on puhta -karoteeniga või karotenoidide seguga. Karotenoidi sisalduse arvutamine (kvantitatiivne analüüs) Kasutatakse neeldumisspektri analüüsimisel saadud andmeid neeldumis- maksimumidele max vastavaid absorptsiooni (A) väärtusi. Reeglina võetakse arvutamisel aluseks selline absorptsiooni väärtus, mis vastab neeldumisspektril kõige kõrgemale ,,tipule"
kus paiknevad iseloomulikud neeldumismaksimumid (max) ja maksimumidele vastavad absorptsiooni (A) e optilise tiheduse (D) täpsed väärtused. Seejärel trükitakse neeldumis- spekter välja ja järgneb spektri analüüsimine. Spektri analüüsimisel võrreldakse uuritava lahuse neeldumisspektril esinevate neeldumis- maksimumide asukohti (lainepikkusi) teatmeteostes leiduvate andmetega erinevate karotenoidide neeldumismaksimumide paiknemise kohta. Tehakse järeldus, kas tegemist on puhta -karoteeniga või karotenoidide seguga. Viimasel juhul antakse hinnang, milline 62 karoteeni isomeer või ksantofüll ekstraktis domineerib ning arvutatakse selle sisaldus uuritavas materjalis. Karotenoidi sisalduse arvutamine (kvantitatiivne analüüs) -karoteeni, mõne teise karoteeni isomeeri või ksantofülli sisalduse määramiseks uurita-
annaabi.ee 
