Molekulaarbioloogia aruanne
molekuli. DNAde otsad seovad komplementaarselt kokku ligaasi abil.
44. Me kasutasime kloneerimiseks pSTBlue-1 vektorit (T-overhangidega), kuhu saab sisestada
saadud DNA järjestuse (A-overhangidega inserdi 3’ otsades). Toimub A-T otste
komplementaarne paardumine ning vektor ja DNA ligeeritakse.
45.
46. pSTBlue-1 vektor sisaldab replikatsiooni vajaliku origini, antibiootikumiresistentsuse geeni
ning ka lacZ operooni, mis annab bakterile lisatoitumisallika, kuna kodeerib β-galaktosidaasi.
β-galaktosidaas lõhub β1-4 glükosiidsidet ja erinevaid substraate ette söötes saame kindlaks
teha, millised meie kasutatud bakterikoloonuatest sisaldavad tühja plasmiidi ja millistel on
insert seda ensüümi kodeeriva järjestuse „ära rikkunud“.
47. Ligeerimiseks tuleb pipeteerida kokku ligeerimissegu (5 μl), segada pipeti või vorteksi abil,
vajadusel fuugida ning jäta ligeerimiseks järgmise päevani +4 °C juures
annaabi.ee 
