peaksime puhvritega jändama, kuna iga restriktaasi jaoks on erinevat soolakontsentratsiooni vaja. Mida silmas pidada kui kasutada mitut erinevat restriktaasi korraga? Millised lõikamiseks sobivad tingimused võivad erineda? Peame vaatama, mis puhvrit kasutame. Erinevatel restriktaasidel on erinevaid soolakontsentratsioone vaja. Samuti tuleks jälgida mis temperatuuri juures need restriktaasid töötavad. Enamusele sobib temperatuus 37 kraadi. Kontrollrestriktsiooni geelipildi analüüs. Minu restriktsioon õnnestus, kuna näeme, et eraldunud bänd on kuskil 600- 700bp, mis peakski nii olema. Rajal ei ole näha teisi segavaid bände ehk restriktaas ei ole kuskilt mujalt lõiganud. Praktiline töö nr.9: Bioinformaatiline sekveneerimise tulemuste analüüs Eesmärk: Kloneeritud plasmiidi sekventsi analüüs ja ümberkloneerimise plaani koostamine Töö käik ja analüüs: 14 Mina valisin DST_T7_E10
Protokoll: 1. Pipeteerida: i. 5,9 l vett ii. 3 l just puhastatud plasmiidset DNA-d iii. 1 l restriktaasi 10x puhvrit iv. 0,1 l EcoRI restriktaasi (hoida külmas!) 2. Segada, fuugida ja inkubeerida 37oC 30 min 3. Valada 100 ml TAE geeli kontsentratsioon valida oodatavate produktide suuruse järgi 4. Kui 30 minutit on täis, tsentrifuugi uuesti oma kontrollrestriktsiooni, et kokku koguda kaanele kogunenud veetilgad 5. Lisa 2 l 6x DNA värvi ning pipeteeri segu agaroosgeeli hambasse 6. 10-15 minuti järel tee geelist pilt ning analüüsi c. i. Tühja plasmiidi lõikamisel oleks bändide pikkused 17 bp (mida on geelipildil praktiliselt võimatu näha, kui kontsentratsioon pole just väga kõrge) ja 3566 bp. Kui insert on sisenenud, on tekkinud bändide pikkused 360 bp ja 3566 bp. Pildilt on näha
annaabi.ee 
