Invertaasi aktiivsuse määramine
Invertaasi aktiivsuse määramiseks kasutatakse sageli substraadina sahharoosi.
Aktiivsuse määramise meetod põhineb sahharoosi hüdrolüüsil uuritava invertaasi
preparaadi toimel ja vabanevate suhkrute ( glükoosi ja fruktoosi) summaarse
kontsentratsiooni määramisel reaktsioonisegus. Sahharoos on teatavasti
mittetaandav disahhariid, glükoos ja fruktoos aga taandavad monosahhariidid.
Antud töös kasutasin glükoosi ja fruktoosi koguse kindlakstegemiseks
kompleksomeetrlist meetodit, kus põhireaktiiviks on tugevalt aluselise
reaktsiooniga lahus, mis sisaldas vask (II)-triloon-B kompleksi. Komplekslahus
täidab aktiivsuse määramisel kaht rolli:
1. Tänu aluselisele reaktsioonile toimib ta invertaasile, mille pH opt = 4,8,
inaktiveerivalt ja lõpetab ensüümreaktsiooni
2. Tagab vajaliku leeliselise keskkonna ja vask(II)-triloon-B kompleksi.
Kindlal ajahetkel reaktsioonisegust võetud proov viiakse kompleklahusesse.