Molekulaarbioloogia aruanne
34. Eesmärgiks on puhastada välja PCRi segust meid huvitav produkt, et vältida praimerite,
nukleotiidide või erinevate soolade mõju järgmisele etapile.
35. Plasmiid mEB1 pEGFP-N1, praimerid mEB1F ja mEB1R. Oodatav pikkus – 700
aluspaari.
36. Puhastamine:
1. Saadud geelitükk kaalus 0,04 g. Lisasin 120 μl ADB-d (0,3 ml 0,1 g geeli kohta)
2. Inkubeerisin 37 °C juures 5 minutit, et geelitükk oleks täielikult sulanud
3. Pipeteerisin segu kolonni, mis on omakorda kogumistopsis. Tsentrifuugimine – 30 sek, et kogu
lahus jookseks läbi kolonni. Visasin läbivoolatud puhver kolonnist ära.
4. Pipeteerisin peale 200 μl pesupuhvrit. Fuugimine – 30 sek, visasin läbivoolatud puhver
kolonnist ära (seda etapi tuleb korrata 2 korda)
5. Järgmisena pipeteerisin kolonni keskele 10 μl MQ vett (elueerimiseks). Vett saab kasuta ainult
juhul, kui selle pH > 6,0.
6. Jälle fuugimine 1 minuti jooksul – praimerite, nukleotiidide ja erinevate soolade eraldamine.
annaabi.ee 
