Veterinaarne geneetika
limaskesta rakud, koeproov.
4. 8. Milleks kasutatakse kvantitatiivset polümeraasi ahelreaktsiooni (RT-PCR), milliseid
põhikomponente selleks vajatakse, millised on RT-PCRi põhietapid?
* Patogeenide (sh viiruste) kvantiteerimine ja identifitseerimine
* geeniekspressiooni kvantiteerimine
* DNA kahjustuste mõõtmine
* proovide valideerimine
* genotüpiseerimine (geenikaardi loomine).
Lisatakse fluorestseeruvat värvainet (SYBR Green). Termotsükleril on fotodetektorid
fluorestsentsi mõõtmiseks.
Seatakse fluorestsentsi intensiivsuse lävi ülevalpool baasfluorestsentsi (nii et mõõtmine
toimuks eksponentsiaalses faasis). Ct on lävetsükkel – tsükli number, mitu korda fluorestsents
on ületanud seatud läve. Fluorestsentssignaali jälgitakse reaktsiooni kestel ja intensiivsus
vastab moodustunud PCR produkti hulga, mida mõõdetakse pärast igat tsüklit.
Faasid: 1
annaabi.ee 
