"ettekasvatamise" - 1 õppematerjal

Mikroobifusioloogia

Baktereid kasvatatakse ette tavaliselt rikkal söötmel teatud kasvufaasi. E. coli rakke kasvatatakse kuni kesk-logaritmilise faasini (OD 0,4), mil on rakud kõige kergemini muudetavad kompetentseteks. Samuti on oluline rakkude tihedus kompetentide lahuses. Üldiselt, mida rohkem rakke on lahuses, seda kõrgem on transformatsiooniefektiivsus. E. coli puhul peetakse optimaalseks 107- 108 rakku 1 ml kohta. Mõnel bakteriliigil suurendab ettekasvatamise temperatuuri langetamine bakterite kompetentsust, näiteks E. coli puhul on transformatsiooniefektiivsus kõrgem, kui rakke kasvatati ette 18 ­ 30 C juures. Sellele järgneb rakkude hoidmine jääl transformatsioonipuhvris. Tõenäoliselt on jääl hoidmine vajalik rakumembraani voolavuse vähendamiseks, sest on leitud, et vähemvoolavate membraanidega bakteritel tekivad mikropoorid paremini. Sel ajal lisatakse ka DNA ning DNA kinnitub passiivselt rakumembraanile