Molekulaarbioloogia aruanne
4. Raputada plaadid segamiseks. Reaktsiooni tulemusena muutub lahuse värvus lillaks (mida
rohkem valku, seda tumedam lilla).
5. Aurumise vältimiseks kaetakse plaat kaane või teibiga, inkubeeritakse 30 min 37°C juures,
mõõdetakse neeldumist 562 nm juures ning saadud väärtuste järgi arvutatakse valgulüsaadi
kontsentratsioon.
116.
117. Transfektsioon
118. Eesmärgiks on tutvustada transfektsiooni meetodit uuritava valgu
ekspresseerimiseks loomarakus.
119. Transfektsioon on võõr-DNA (plasmiidid) või RNA (siRNAd)
viimine loomarakku. Plasmiidi sisseviimiseks peavad rakud ennast hästi tundma ja paraja
tihedusega olema (reeglina 50-70%).
120. Transfekteerimiseks kasutatakse erinevaid võimalusi: keemilised
meetodid (nt. kaltsiumfosfaat, katioonsed polümeerid, dendrimeerid, liposoomid ja
katioonsed lipiidid) ja füüsikalised meetodid (nt