"eksklusioonipiirkond" - 1 õppematerjal

Biokeemia praktikumi juhend

1. Dekstraansinine (Mr = 2 · 106), 2 mg/ml 2. Broomfenoolsinine (Mr = 670), 40 g/ml 3. Uuritav valk, 10 mg/ml Proovi lahustina ja kolonni elueerimiseks võib kasutada 0,15 M NaCl lahust. Kui kasutatav kolonn on eelnevalt kaliibritud valkudega, milliste molekulmassid on teada, siis on võimalik uuritavas proovis sisalduvat valku molekulmassi järgi kindlaks teha. Olgu näiteks toodud variant, kus uuritava segu lahutamine on läbiviidud Sephadex G-100 kolonnis. Valkude jaoks on selle geeli eksklusioonipiirkond umbes 100 000. Sellisel juhul saab uuritavas segus sisalduva tundmatu valgu identifitseerimiseks kasutada tabelis esitatud andmete alusel ehitatud kaliibrimissirget, mille x-teljel on siintoodud valkude (standardvalkude) Rf väärtused ja y-teljel log Mr. Valkude jaotumine Sephadex G-100 kolonnis Valk Molekumass (Mr, kDa) Rf väärtus Veise albumiin 69 0,21