Molekulaar- ja rakubioloogia
5. Korda alates 2. punktist veel 21 korda
Esimese etapi pikkus sõltub valitud ensüümist, me kasutasime Hot FIREPol DNA
polümeraasi, mis aktiveerub pärast 15 minutit inkubeerimist 95 o C juures. Teine etapp on
vajalik selleks, et kas lisatud template DNA või eelmises tsüklis sünteesitud DNA ahelad
denatureeruks, see peab olema võimalikult lühike. Kolmanda etapi (annealingu) pikkus sõltub
kasutatud praimerite järjestusest mida suurem on G-de ja C-de arv, seda rohkem on vaja
aega annealinguks. Kuna me kasutasime erinevaid praimereid, kuid sama programmi, ei
pruugi annealingu aeg olla täiesti optimaalne, kuid siiski piisavalt täpne. Sünteesi pikkus
sõltub nii kasutatavast ensüümist kui ka paljundatava järjestuse pikkusest, kuna me
kasutasime kõik sama programmi, siis on valitud pigem pikem aeg (valitud on 3 minutit,
lühemate järjestuste puhul piisaks ka 1 minutist). Korduste arv sõltub sellest, kui palju on vaja
annaabi.ee 
