Biokatalüüs, proteolüütilise ensüümi aktiivsuse määramine (0)

Laboratoorne töö nr: 2
Töö pealkiri:
Biokatalüüs, proteolüütilise ensüümi aktiivsuse määramine
Õpperühm:
YASB21 C
Üliõpilane:
Ilona Juhanson , 123964YASB
Juhendaja :
Tiina Randla
Proteolüütilised ensüümid ehk proteaasid on ensüümid, mis katalüüsivad peptiidsideme hüdrolüüsi, mille tagajärjel saadakse madalama molekulmassiga peptiide ja vabu aminohappeid . Proteaase leidub kõigis organismides ning nad osalevad paljude füsioloogiliste funktsioonide täitmises, alates seedimisest ning lõpetades kõrgreguleeritud ensüümireaktsioonidega (nt vere hüübimine).
Proteaasidel on erinev toimespetsiifika. Mõned lõhustavad eelistatult vaid teatud aminohapetega külgnevaid peptiidsidemeid (piiratud proteolüüs), teised toimivad üldisemalt (piiramatu proteolüüs).
Piiratud proteolüüsi proteaasid:
- Trüpsiin (R1= Lys, Arg; R2=/ Pro)
- Kümotrüpsiin (R1= Tyr, Phe, Trp, Leu, Ile, Val; R2=/ Pro)
- Pepsiin (R1= Phe, Leu, jpt; R2=/ Pro)
Ühtlasi ka endopeptidaasid.
Eristatakse endo - ja eksopeptidaase sõltuvalt sellest, kas proteaas toimib ahela kesksetele või otsmistele peptiidsidemetele.
Eksopeptidaasideks on karboksüpeptidaasid (R2= C- terminaalne aminohape ) ja aminopeptidaasid (R1= N-terminaalne aminohape), mis lühendavad peptiide ühekaupa C- või N-terminaalseid aminohappeid vabastades.
Optimaalne pH väärtuse järgi eristatakse hapusid (pH~2,5), neutraalseid (pH~7,2) ja leelisproteaase (pH~9,0).
Aktiivtsentri ehitusest, millised aminohapped sinna kuuluvad, tuleneb ensüümi toimemehhanism.
Ensüümi proteolüütilise aktiivsuse ühikuks 1 mikrokat loetakse sellist ensüümi hulka, mis põhjustab 1 mikromooli peptiidsidemete